以菌落原位雜交為例：對分散在若干個瓊脂平板上的少數(shù)菌落（100-200）進行篩選時，可采用該方法。將這些菌落歸并到一個瓊脂主平板以及已置于第二個瓊脂平板表面的一張纖維素濾膜上。經(jīng)培養(yǎng)一段時間后，對菌落進行原位裂解。主平板應貯存于4℃直至得到篩選結果。
將少數(shù)菌落轉(zhuǎn)移到纖維素濾膜上
（1） 在含有選擇性的瓊脂平板上放一張纖維素濾膜。
（2） 用無菌牙簽將各個菌落先轉(zhuǎn)移至濾膜上，再轉(zhuǎn)移至含有選擇性但未放濾膜的瓊脂主平板上。應按一定的格子進行劃線接種（或打點）。每菌落應分別劃線于兩個平板的相同位置上。后，在濾膜和主平板上同時劃一個含有非重組質(zhì)粒的菌落。
（3） 倒置平板，于37℃培養(yǎng)至劃線的細菌菌落生長到0.5-1.0mm的寬度。
（4） 用已裝防水黑色繪圖墨水的針頭穿透濾膜直至瓊脂，在3個以上的不對稱位置作標記。在主平板大致相同的位置上也作上標記。
（5） 用Parafilm膜封好主平板，倒置貯放于4℃，直至獲得雜交反應的結果。
（6） 裂解細菌，按本段下面所述方法，使釋放的DNA結合于纖維素濾膜。
原位雜交是一種非常重要的技術，因為它可以在細胞或組織的自然環(huán)境中研究基因表達和調(diào)控。它可以幫助科學家們了解基因在特定組織或細胞類型中的作用和功能，以及在疾病發(fā)生和發(fā)展過程中的變化。此外，這項技術還可以用于檢測基因變異和染色體異常，以及監(jiān)測細胞生長和凋亡。
雖然原位雜交是一項非常有用的技術，但它也有一些限制。首先，探針的特異性可能受到干擾，導致錯誤的結果。其次，探針的數(shù)量和位置可能受到細胞或組織中其他成分的影響。此外，這項技術的操作比較繁瑣，需要專門的技術和設備，而且需要大量的實驗和對照才能獲得可靠的結果。
原位雜交技術的定義和基本原理原位雜交技術是一種基于核酸分子雜交原理，將標記的核酸探針與生物組織或細胞中的DNA或RNA進行特異性結合，從而在細胞水平上檢測目標核酸序列分布的技術。原位雜交技術的基本原理是利用DNA或RNA的互補性，通過加熱或化學反應使探針與組織或細胞中的目標核酸序列形成雙鏈復合物，進而實現(xiàn)目標核酸序列的定位。
生物領域應用原位雜交技術的例子：
基因表達和調(diào)控研究：原位雜交技術可以用于研究基因表達的調(diào)控機制。例如，可以標記特定基因的探針，檢測該基因在不同環(huán)境、不同生長條件下的表達情況，進而研究其表達調(diào)控機制。
細胞分化與發(fā)育研究：在細胞分化與發(fā)育研究中，原位雜交技術常被用于檢測和定位特定基因的表達情況，進而了解細胞分化的過程和機制。例如，可以標記與細胞分化相關的基因探針，檢測該基因在不同組織、不同發(fā)育階段的表達情況。
以上信息由專業(yè)從事熒光原位雜交的貝科新肽于2025/1/8 21:01:43發(fā)布
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