預(yù)雜交
1)每個管中置換成大約300ulHYB-溶液,60℃水浴5分鐘,避免振蕩。
2)用等體積的HYB+取代HYB-。
3)60℃水浴,預(yù)雜交4小時以上。
雜交
1)吸去預(yù)雜交的HYB+,加上100ul已加入探針的HYB+溶液(探針濃度約為1ng/ul)..
2)60℃ 溫浴過夜。
注:雜交與預(yù)雜交的溫度可以是55到60度不等,溫度越低,探針結(jié)合越好,溫度越高,背景越小。
原位雜交技術(shù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果
原位雜交技術(shù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果包括陽性信號和陰性信號的判斷標(biāo)準(zhǔn)。陽性信號是指探針與目標(biāo)核酸序列特異性結(jié)合形成的雙鏈復(fù)合物,在顯色反應(yīng)、熒光染色或性同位素標(biāo)記下呈現(xiàn)出明顯的信號。陰性信號是指探針未與目標(biāo)核酸序列結(jié)合,不呈現(xiàn)任何信號。實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析需要結(jié)合探針的特異性和敏感性、組織或細(xì)胞的原始結(jié)構(gòu)以及實(shí)驗(yàn)條件等因素綜合進(jìn)行。
原位雜交(In Situ Hybridization)是指將特定標(biāo)記的已知核酸序列為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交,從而對特定核酸序列進(jìn)行定量定位的過程。這個技術(shù)可以用于研究細(xì)胞或組織中特定基因或DNA序列的表達(dá)和定位,從而幫助研究者深入理解和探究生物學(xué)過程。原位雜交有幾種不同的類型,包括熒光原位雜交和其他用于基因表達(dá)分析的方法。以上信息由專業(yè)從事GISH的貝科新肽于2025/1/8 11:07:56發(fā)布
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