菌落的裂解及DNA結(jié)合于纖維素濾膜
（1） 在一張保鮮膜上制作一個(gè)裝有0.5mol/L NaOH的小洼（0.75ml），使菌落面朝上，將濾膜放到小洼上，展平保鮮膜，使濾膜均勻濕潤(rùn)，讓濾膜留于原處2-3分鐘。
（2） 用干紙巾從濾膜的下方吸干濾膜，用一張新的保鮮膜和新配制的0.5mol/L NaOH重復(fù)步驟（1）。
（3） 吸干濾膜，將濾膜轉(zhuǎn)移到新的帶有1mol/L Tris·Cl(pH7.4）的保鮮膜洼上。5分鐘后吸干濾膜，再重復(fù)一次該步驟。
（4） 吸干濾膜，把它轉(zhuǎn)移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4）的保鮮膜小洼上5分鐘后吸干濾膜，轉(zhuǎn)移到一張干的濾紙上，置于室溫20-30分鐘，使濾膜干燥。
（5） 將濾膜夾在兩張干的濾紙之間，在真空烤箱中于80℃干烤2小時(shí)，固定DNA。
（6） 將固定在膜上的DNA與32 P標(biāo)記的RNA進(jìn)行雜交。
把濾膜放在紙巾上于室溫晾干后，把濾膜（編號(hào)面朝上）放在一張保鮮膜上，并在保鮮膜上作幾個(gè)不對(duì)稱的標(biāo)記，以使濾膜與性自顯影片位置對(duì)應(yīng)。
用第二張保鮮膜蓋住濾膜。加光片并加上增感屏于-70℃曝光12-16小時(shí)。
底片顯影后，在底片上貼一張透明硬紙片。在紙上標(biāo)記陽(yáng)性雜交信號(hào)的位置，同時(shí)在不對(duì)稱分布點(diǎn)的位置上作出標(biāo)記?？蓮牡灼先∠峦该骷垼ㄟ^(guò)對(duì)比紙上的點(diǎn)與瓊脂上的點(diǎn)來(lái)鑒定陽(yáng)性菌落。
原位雜交技術(shù)（in situhybridization）是以標(biāo)記的核酸分子為探針，在組織細(xì)胞原位檢測(cè)特異核酸分子的技術(shù)。使含有特異序列、經(jīng)過(guò)標(biāo)記的核酸單鏈即探針，在適宜條件下與組織細(xì)胞中的互補(bǔ)核酸單鏈即靶核酸發(fā)生雜交，再以自顯影或細(xì)胞化學(xué)方法對(duì)標(biāo)記探針進(jìn)行探測(cè)，從而在細(xì)胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。
可以檢測(cè)cRNA、miRNA、LnRNA、DNA?？梢愿鞣N種屬的標(biāo)本，包括哺乳動(dòng)物、爬行動(dòng)物、菌、植物標(biāo)本。也可以檢測(cè)組織芯片。
植物組織原位雜交是一種重要的分子生物學(xué)技術(shù)，它可以用來(lái)研究植物基因的表達(dá)和調(diào)控。該技術(shù)利用DNA探針與目標(biāo)組織中的RNA或DNA結(jié)合，從而確定目標(biāo)基因的表達(dá)模式和位置。本文將介紹植物組織原位雜交的原理、步驟和應(yīng)用。
原理
植物組織原位雜交的原理是利用DNA探針與目標(biāo)組織中的RNA或DNA結(jié)合，從而確定目標(biāo)基因的表達(dá)模式和位置。DNA探針是一段已知序列的DNA分子，可以與目標(biāo)RNA或DNA的互補(bǔ)序列結(jié)合。在組織原位雜交中，DNA探針通常標(biāo)記有熒光染料或性同位素，以便于檢測(cè)。
以上信息由專業(yè)從事染色體原位雜交的貝科新肽于2025/1/6 19:02:22發(fā)布
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